Влияние керамического материала на основе цирконата лантана на динамику гематологических показателей и маркеров ремоделирования костной ткани: экспериментальное исследование

Полный текст

Введение

Костная пластика используется при хирургическом лечении переломов, парциальных остеохондральных дефектов, при дегенеративно-дистрофических заболеваниях крупных суставов и онкопатологии костно-мышечной системы [1]. В практической медицине широкое распространение получили керамические остеозамещающие материалы, благодаря их хорошей биосовместимости и оптимальным физико-химическим характеристикам [2, 3]. Вместе с тем активно проводятся исследования, посвященные модификации химической структуры таких материалов для оптимизации качеств, необходимых для их использования в травматологии и ортопедии. Доказано, что введение в состав керамики циркония существенно улучшает механические свойства материалов [4, 5]. Кроме того, присутствие циркония в композитах не оказывает цитотоксического воздействия на преостеобласты и улучшает реакцию остеобластов in vitro [6, 7]. Известно также, что редкоземельные элементы, в частности лантан, оказывают значительное влияние на коррозионную стойкость композитов [8]. Экспериментально показано, что хлорид лантана ингибирует образование остеокластов, функцию и экспрессию генов, специфичных для остеокластов, ослабляет остеолиз, вызванный частицами Ti [9]. Наличие кальция в композитном материале и его высвобождение из керамического имплантата может опосредовать экспрессию остеопонтина, который не только связывается с гидроксиапатитом кости, участвуя в ее формировании, но и имеет интегрин-связывающий домен и, следовательно, может способствовать прикреплению и пролиферации клеток на поверхности имплантата [10].

В лаборатории твердооксидных топливных элементов ИВТЭ УрО РАН был синтезирован новый композитный керамический материал, содержащий оксид циркония, кальций и лантан (La_1.95Ca_0.05Zr₂O₇). Ранее в наших работах было показано, что в эксперименте по использованию данного материала в качестве имплантата система «цирконат лантана – кость» при одноосном сжатии по прочности превосходит неповрежденную костную ткань. Кроме того, анализ Са/Р отношения показал, что уже в раннем послеоперационном периоде образующаяся кость имеет более высокие прочностные характеристики в периимплантной области, чем нативная кость [5]. Вместе с тем важно понимать, оказывает ли новый керамический материал на основе цирконата лантана (ЦЛ) негативное воздействие на организм, а также определить динамику и выраженность процессов резорбции и остеогенеза при имплантации La_1.95Ca_0.05Zr₂O₇.

Целью исследования было определение влияния нового керамического материала на основе цирконата лантана на динамику основных гематологических показателей и выраженность маркеров ремоделирования костной ткани при интрамедуллярном остеосинтезе перелома в эксперименте.

Материал и методы

Материал

Цирконат лантана (La_1.95Ca_0.05Zr₂O₇) синтезирован цитрат-нитратным методом. Цирконий составляет 19,92±0,20 ат.%, лантан — 21,24±0,16 ат.%, кислород — 58,54±0,33 ат.%, кальций — 0,30±0,03 ат.%. По данным растровой электронной микроскопии, материал имеет закрытый тип пористости с объемной долей пор не более 15%, размер пор — 2–30 мкм. Стержни для синтеза перелома (интрамедуллярной имплантации) длиной 25 мм имели квадратное (1,5×1,5 мм) сечение. Стержни аналогичного размера были изготовлены из β-трикальцийфосфата.

Исследование выполнено на 30 линейных морских свинках (самки). Животные находились в идентичных условиях кормления и содержания. Все животные имели ветеринарный сертификат. Все процедуры, касающиеся животных, были проведены в соответствии с национальными «Методическими рекомендациями по содержанию лабораторных животных в вивариях научно-исследовательских институтов и учебных заведений» и Директивой Европейского парламента и Совета Европейского Союза по охране животных, используемых в научных целях.

Дизайн исследования

В основную группу вошли 9 животных, которым был проведен ИО перелома дистального метадиафиза бедренной кости стержнем из цирконата лантана (группа ЦЛ). Группу сравнения составили 9 животных, которым выполнен ИО стержнем из b-трикальцийфосфата (группа ТКФ). В контрольную группу (К) вошли 9 животных, которым проводилось моделирование перелома, но имплантации стержня не выполнялось. Группу нативного контроля (группа НК) составили 3 морские свинки, которые не были прооперированы.

Перед операцией экспериментальным животным групп ЦЛ, ТКФ и К проводили премедикацию (ксилазин 0,2 мг/кг внутримышечно) и анестезию (золетил 0,1 мг/кг внутримышечно), после чего их укладывали в положении лежа на спине. Для местного обезболивания использовали 0,25% новокаина, которым выполняли также гидравлическую диссекцию тканей. Перелом создавался методом открытой остеоклазии в области дистального метадиафиза бедренной кости. В группах ЦЛ и ТКФ проводили ИО перелома стержнями из ЦЛ и b-трикальцийфосфата соответственно. В группе К синтез перелома стержнем не проводили. Всем прооперированным животным в качестве антибиотикопрофилактики вводили ампициллин (1 раз в сутки, в течение 3 дней после операции).

Животные группы НК выводились из эксперимента без хирургического вмешательства. В группах ЦЛ, ТКФ и К по 3 животных выводились из эксперимента через 4, 10 и 25 недель после операции.

Методы исследования

Забор крови проводился пункцией сердца. Для отбора образцов использовали вакуумные пробирки для гематологических и биохимических исследований (Rustech, Россия). Клинический анализ крови проводился с использованием автоматического гематологического анализатора Cell-70 (Biocode-Hygel, France). Для оценки уровня маркеров костного ремоделирования в сыворотке крови определяли концентрацию остеокальцина (ОС) и активность тартрат-резистентной кислой фосфатазы (ТРКФ) методом двухсайтового твердофазного гетерогенного ИФА. Использовали тест-системы Cloud-Clone Corp (Китай) и планшетный фотометр Termo Scirntific Multiskan GO (Япония).

Статистический анализ

Статистическая обработка данных проводилась методами вариационной статистики с использованием программы Statistica 8.0. Для сравнения исследуемых групп использовался критерий Краскела – Уоллиса. Парное сравнение между группами проводили с использованием критерия Манна – Уитни. Уровень р<0,05 принимался статистически значимым. Данные представлены как медиана [интерквартильный размах].

Результаты

В таблице 1 представлены основные гематологические показатели экспериментальных животных в послеоперационном периоде.

 

Таблица 1. Гематологические показатели животных в различные сроки после операции

Группа животных	Срок после операции, нед.				р2
	0 (НК)	4	10	25
Эритроциты, 1012/л
К	5,20 [4, 62; 5, 83]	5,88 [5, 40; 6, 19]	4,27 [3, 97; 5, 31]	5,11 [4, 62; 6, 08]	0,159
ТКФ		5,35 [5, 25; 5, 63]	5,44 [5, 21; 5, 53]	5,22 [4, 32; 5, 23]	0,450
ЦЛ		5,18 [4, 92; 5, 50]	5,32 [4, 27; 6, 15]	5,10 [5, 02; 5, 12]	0,863
p1		0,135	0,236	0,875
Гемоглобин, г/л
К	135 [129; 151]	129 [121;139]	11,2 [9, 7; 13, 2]	13,3 [12, 4; 14, 3]	0,270
ТКФ		135 [135; 140]	13,5 [12, 8; 14, 2]	12,5 [10, 8; 13, 1]	0,164
ЦЛ		136 [136; 140]	13,9 [11, 8; 15, 1]	12,6 [12, 2; 12, 9]	0,924
p1		0,326	0,193	0,430
Лейкоциты, 109/л
К	6,4 [4, 6; 7, 7]	6,8 [5, 1; 7, 4]	8,0 [7, 9; 10, 6]	7,8 [6, 7; 11, 3]	0,099
ТКФ		6,7 [5, 5; 7, 5]	4,9 [4, 3; 5, 3]	8,4 [6, 3; 8, 5]	0,229
ЦЛ		7,5 [7, 4; 9, 9]	5,3 [5, 2; 5, 6]	6,9 [6, 5; 8, 8]	0,113
p1		0,246	0,044	0,875
Гранулоциты, 109/л
К	4,0 [2, 0; 4, 5]	2,0 [2, 0; 2, 3]	5,1 [4, 0; 7, 4]	3,4 [3, 3; 4, 2]	0,097
ТКФ		2,8 [1, 4; 3, 8]	2,3 [2, 2; 2, 4]	4,2 [3, 5; 4, 3]	0,269
ЦЛ		3,4 [2, 0; 4, 1]	2,0 [1, 8; 3, 6]	4,70 [4, 1; 4, 9]	0,172
p1		0,209	0,043	0,223
Лимфоциты, 109/л
К	1,8 [1, 3; 2, 0]	1,3 [1, 0; 1, 9]	1,2 [1, 0; 3, 4]	1,5 [1, 0; 6, 3]	0,832
ТКФ		1,7 [0, 8; 2, 9]	1,1 [0, 8; 1, 3]	1,7 [1, 1; 2, 5]	0,535
ЦЛ		2,4 [1, 8; 2, 8]	1,6 [1, 2; 1, 7]	1,9 [1, 3; 2, 1]	0,094
p1		0,532	0,361	0,956
Моноциты, 109/л
К	1,1 [0, 8; 1, 2]	0,1 [0, 1; 0, 2]	1,9 [0, 6; 2, 0]	1,6 [1, 5; 3, 0]	0,049
ТКФ		1,6 [1, 2; 1, 7]	1,4 [1, 3; 1, 7]	2,4 [1, 0; 2, 5]	0,253
ЦЛ		1,7 [1, 6; 1, 8]	1,5 [0, 8; 1, 9]	2,2 [1, 7; 2, 6]	0,170
p1		0,041	0,790	0,875
Тромбоциты, 109/л
К	421 [399; 511]	583 [444; 636]	387 [371; 411]	445 [405; 517]	0,092
ТКФ		479 [393; 574]	346 [306; 435]	355 [330; 512]	0,537
ЦЛ		530 [452; 590]	454 [451; 610]	384 [243; 518]	0,270
p1		0,413	0,061	0,561
Тромбокрит, %
К	0,26 [0, 25; 0, 36]	0,29 [0, 24; 0, 33]	0,26 [0, 21; 0, 26]	0,29 [0, 27; 0, 34]	0,340
ТКФ		0,28 [0, 25; 0, 37]	0,23 [0, 21; 0, 27]	0,23 [0, 21; 0, 31]	0,413
ЦЛ		0,3 [0, 3; 0, 4]	0,3 [0, 3; 0, 4]	0,3 [0, 2; 0, 3]	0,577
p1		0,722	0,064	0,429

р1 — статистическая значимость различий между группами в определенной временной точке; р2 — статистическая значимость различий между временными точками.

 

Количество эритроцитов и уровень гемоглобина в группах прооперированных животных через 4, 10 и 25 нед. после хирургического вмешательства не имели существенных отличий от группы животных, которым операция не проводилась. Сравнение между группами ЦЛ, ТКФ и К на протяжении периода исследования также не выявило значимых различий.

Уровень лейкоцитов в группах ЦЛ и ТКФ в исследуемом промежутке времени колебался, но данные изменения не достигали статистической значимости. Значительно более высокий по сравнению с другими группами уровень лейкоцитов отмечался в контрольной группе спустя 10 нед. после операции. Парное сравнение групп в тесте Манна – Уитни подтвердило существенное отличие группы К от групп ЦЛ, ТКФ (p<0,05 в обоих случаях). При этом значимых различий между группами ЦЛ и ТКФ не обнаружено. Парное сравнение показало также существенное повышение уровня лейкоцитов у животных контрольной группы относительно группы НК.

Анализ различных видов лейкоцитов в крови экспериментальных животных выявил значимое повышение уровня гранулоцитов в группе К спустя 10 нед. после операции. Парное сравнение показало значимые отличия как от групп ЦЛ и ТКФ, так и от группы НК (p<0,05 для всех). Умеренный лейкоцитоз с повышением уровня гранулоцитов в группе К может объясняться умеренным воспалением, обусловленным отсутствием фиксации перелома у экспериментальных животных.

Уровень моноцитов в группах ЦЛ и ТКФ был существенно выше, чем в группе К, спустя 4 нед. после операции. Данное отличие объясняется реакцией организма на имплантат. Важно отметить, что не выявлено различий в количестве моноцитов между группами ЦЛ и ТКФ в данной временной точке (p = 0,539), что может свидетельствовать о сходной реакции организма на новый материал ЦЛ и на ТКФ. К 10-й нед. различия между группами К, ЦЛ и ТКФ нивелировались.

Признаки стандартной реакции тромбоцитов на хирургическое вмешательство сохранялись до 4 нед. после операции, что проявилось в небольшом повышении уровня тромбоцитов во всех группах прооперированных животных, хотя различия не имели статистической значимости в сравнении с группой НК. Значимых изменений в уровне тромбоцитов относительно группы НК не обнаружено и в сроки 10 и 25 нед. Существенных различий между группами ЦЛ, ТКФ и К не выявлено в течение изучаемого периода времени.

Динамика маркеров костного ремоделирования после проведения экспериментальным животным хирургического вмешательства представлена в таблице 2.

 

Таблица 2. Маркеры костного ремоделирования у животных в различные сроки после операции

Группа животных	Срок после операции, нед.				p2
	0 (НК)	4	10	25
Тартрат-резистентная кислая фосфатаза, Ед/л
К		0,78 [0, 72; 1, 24]	0,82 [0, 81; 0, 84]	0,17 [0, 16; 0, 47]	0,040
ТКФ	0,27 [0, 12; 0, 37]	0,91 [0, 68; 1, 15]	0,48 [0, 25; 0, 64]	0,18 [0, 09; 0, 28]	0,028
ЦЛ		0,80 [0, 61; 0, 95]	0,49 [0, 36; 0, 65]	0,21 [0, 15; 0, 22]	0,038
p1		0,796	0,041	0,957
Остеокальцин, нг/мл
К	3,83 [3, 33; 4, 07]	4,41 [4, 22; 4, 50]	3,98 [3, 75; 4, 05]	4,19 [3, 61; 4, 29]	0,113
ТКФ		4,14 [4, 11; 4, 16]	4,57 [4, 35; 4, 93]	3,83 [3, 81; 3, 97]	0,012
ЦЛ		4,05 [3, 84; 4, 57]	4,38 [4, 30; 4, 50]	3,92 [3, 83; 4, 05]	0,042
p1		0,439	0,051	0,618

р1 — статистическая значимость различий между группами в определенной временной точке; р2 — статистическая значимость различий между временными точками.

 

Концентрация маркера остеорезорбции ТРКФ в группах ЦЛ и ТКФ имела максимальные значения через 4 нед. после операции, к 10-й нед. наблюдалось постепенное снижение уровня данного фермента. В контрольной группе животных высокая концентрация ТРКФ сохранялась до 10-й нед. после операции, что, по-видимому, связано с отсутствием фиксации травмированной кости. К 25-й нед. после операции уровень ТРКФ во всех группах оперированных животных был сопоставим с уровнем данного фермента в группе НК.

Повышение уровня маркера остеогенеза ОК наблюдалось с 4-й нед. после операции во всех группах прооперированных животных. Максимальное повышение ОК в группах ЦЛ и ТКФ приходилось на 10-ю послеоперационную неделю. При этом в группе К по сравнению с группами ЦЛ и ТКФ наблюдался существенно более низкий уровень ОК. К 25-й нед. уровень данного маркера остеогенеза в группах прооперированных животных не имел значимых отличий от группы НК.

Обсуждение

Керамические материалы на основе диоксида циркония доказали свою перспективность для реконструкции и восстановления функциональности поврежденной кости [11, 12, 13]. Введение в остеозамещающий материал лантана и кальция также способствует улучшению биоинтеграционных свойств имплантатов [9, 10].

Ранее мы показали в эксперименте, что имплантаты из нового керамического материала La_1.95Ca_0.05Zr₂O₇ обладают хорошими механической свойствами. Было определено, что в периимплантной области отношение Са/Р больше, чем в нативном образце, что свидетельствует о высокой прочности вновь образующейся кости [5]. Вместе с тем важно понимать, какое влияние оказывает на организм введение нового материала. В представленной работе мы изучали динамику основных гематологических показателей через 4, 10, 25 нед. после интрамедуллярного остеосинтеза перелома бедренной кости у экспериментальных животных стержнями из La_1.95Ca_0.05Zr₂O₇. Известно, что при имплантации керамического остеопластического материала у эспериментальных животных наблюдается стереотипная реакция крови с умеренной анемией и лейкоцитозом в раннем послеоперационном периоде и восстановлением дооперационного уровня спустя 2 нед. после операции [14]. Полученные в нашей работе гематологические параметры показывают, что имплантаты на основе цирконата лантана обладают хорошей гемосовместимостью и не стимулируют воспалительную реакцию in vivo, поскольку лейкоцитарный уровень не превышает таковой у нативных животных. Отсутствие воспаления при длительном (25 нед.) нахождении имплантата в организме экспериментальных животных подтверждается также уровнем тромбоцитов, который не имеет значимых отличий от нативного. Определение динамики эритроцитарного уровня также не выявило негативного влияния нового материала: не обнаружено признаков гемолиза эритроцитов в течение всего срока наблюдения. ТКФ хорошо известен и широко применяется в качестве остеозамещающего материала [15, 16, 17]. Сравнение нового керамического материала на основе цирконата с ТКФ не выявило существенных различий между ними по основным гематологическим показателям. В среднесрочном и отдаленном периодах показатели крови на фоне имплантации обоими материалами не отличались от аналогичных показателей у нативных животных.

Процессы ремоделирования костной ткани при ее повреждении сопровождаются изменением в крови уровня маркеров, отражающих функциональную активность остеокластов и остеобластов [18, 19, 20]. В частности, ТРКФ секретируется остеокластами, обеспечивая деградацию органического костного матрикса, используется в качестве сывороточного маркера активности остеорезорбции [21, 22]. Остеокальцин экспрессируется в процессе формирования кости и контролирует массу, размер, ориентацию минерального компонента, участвует в организации внеклеточного матрикса, признается информативным маркером остеогенеза [23, 24].

Различия в локализации и тяжести переломов находят отражение в динамике маркеров костного ремоделирования [18]. Информативность данных маркеров показана при оценке успешности восстановления костной ткани и выявлении нарушений остеогенеза при хирургическом лечении травм и ортопедических заболеваний [25, 26, 27, 28]. В экспериментальных исследованиях маркеры остеогенеза и остеорезорбции позволяют определять успешность ремоделирования кости при изучении вновь созданных остеозамещающих материалов, проводить сравнение с материалами, уже использующимися в клинической практике [29].

Ранее в эксперименте на кроликах было показано, что максимум резорбции наблюдается к 4-й нед. после введения остеозамещающего материала [14, 29]. В нашем исследовании также наиболее активная резорбция костной ткани наблюдалась через 4 нед. после операции, причем интенсивность выделения в кровь маркера резорбции была близкой при имплантации ТКФ и ЦЛ. Важно отметить, что отсутствие интрамедуллярного остеосинтеза перелома (в контрольной группе) приводит к более длительному сохранению активного процесса костной резорбции. В отдаленном периоде после имплантации новым керамическим материалом не выявлено признаков активации остеорезорбции, что свидетельствует об эффективной остеоинтеграции имплантата.

Данные литературы свидетельствуют о большом разнообразии маркера остеогенеза ОК в динамике при повреждении костной ткани и при замещении дефектов кости различными остеопластическими материалами [18, 30, 31]. Ранее было показано, что применение ТКФ для восполнения травматического дефекта костной ткани ассоциировано с существенно более высоким уровнем выделения в кровь ОК по сравнению с другими материалами, использованными для имплантации [14]. В нашем исследовании изменения ОК в крови были сопоставимы при имплантации ТКФ и ЦЛ, что может свидетельствовать об эффективном остеогенезе у животных, которым вводили новый керамический материал.

Заключение

Таким образом, определение основных гематологических показателей после имплантации интрамедуллярного стержня из нового керамического материала на основе цирконата лантана не выявило отрицательного влияния данного материала на организм экспериментальных животных. Обнаружено его положительное влияние на процесс ремоделирования костной ткани. Новый керамический композит La_1.95Ca_0.05Zr₂O₇ представляется перспективным для использования в качестве остеозамещающего материала в травматологии и ортопедии, что может служить основанием для проведения дальнейших исследований по оптимизации процессов остеоинтеграции при имплантации конструкций из данного материала в костную ткань.

Дополнительная информация

Благодарности

Авторы выражают благодарность заведующей лабораторией электрохимического материаловедения Института высокотемпературной электрохимии УрО РАН д-р хим. наук Л.А. Дунюшкиной за предоставление нового керамического материала, сотрудникам Института иммунологии и физиологии УрО РАН В.В. Герасимовой за помощь в работе с эксперимнтальными животными и С.А. Бриллиант за содействие в проведении гематологических исследований.

Заявленный вклад авторов

Антропова И.П. — обработка и анализ данных, написание рукописи.

Волокитина Е.А. — концепция и дизайн исследования, написание рукописи.

Удинцева М.Ю. — проведение экспериментальной работы, обработка и анализ данных, написание рукописи.

Юшков Б.Г. — концепция и дизайн исследования.

Тюменцева Н.В. — проведение экспериментальной работы, анализ данных, участие в написании статьи.

Кутепов С.М. — концепция и дизайн исследования.

Все авторы прочли и одобрили финальную версию рукописи статьи. Все авторы согласны нести ответственность за все аспекты работы, чтобы обеспечить надлежащее рассмотрение и решение всех возможных вопросов, связанных с корректностью и надежностью любой части работы.

Источник финансирования. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Этическая экспертиза. Исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России Уральского отделения РАН, протокол № 03/20 от 22 сентября 2020 г.

Информированное согласие. Не требуется.

Disclaimers

Acknowledgments

The authors are grateful to Dr. Lilia. A. Dunyushkina for providing a new ceramic material, Valentina.V. Gerasimova for assistance in working with experimental animals, Svetlana А. Brilliant for assistance in conducting hematological studies.

Author contribution

Antropova I.P. — the evaluation and interpretation of the data and the preparation of the text.

Volokitina E.A. — research conception and design, writing the draft.

Udintseva M.Yu. — research conduction, collection and processing of material, writing the draft.

Yushkov B.G. — research conception and design.

Tyumentseva N.V. — research conduction, collection and processing of material, writing the draft

Kutepov S.M. — research conception.

All authors have read and approved the final version of the manuscript of the article. All authors agree to bear responsibility for all aspects of the study to ensure proper consideration and resolution of all possible issues related to the correctness and reliability of any part of the work.

Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

Ethics approval. The study was approved by the local ethics committee of Ural State Medical University, protocol No 03/20, 22.09.2020.

Consent for publication. Not required.

Об авторах

Ирина Петровна Антропова

ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России; ФГБУН «Институт высокотемпературной электрохимии» Уральского отделения РАН

Email: aip.hemolab@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9957-2505

д-р биол. наук, ведущий научный сотрудник, заведующая лабораторией

Россия, 620028, Екатеринбург, ул. Репина, 3; Екатеринбург

Елена Александровна Волокитина

ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: volokitina_elena@rambler.ru
ORCID iD: 0000-0001-5994-8558

профессор, д.м.н., зав. кафедрой травматологии и ортопедии

Россия, 620028, Екатеринбург, ул. Репина, 3

Мария Юрьевна Удинцева

ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России

Email: izmodenova96@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-5500-4012

аспирант кафедры

Россия, 620028, Екатеринбург, ул. Репина, 3

Борис Германович Юшков

ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России; ФГБУН «Институт иммунологии и физиологии» Уральского отделения РАН

Email: b.yushkov@iip.uran.ru
ORCID iD: 0000-0001-8780-9889

д-р мед. наук, профессор, заведующий лабораторией, профессор кафедры

Россия, 620028, Екатеринбург, ул. Репина, 3; Екатеринбург

Наталия Валерьевна Тюменцева

ФГБУН «Институт иммунологии и физиологии» Уральского отделения РАН

Email: tumen80@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2949-6607

канд. биол. наук, старший научный сотрудник

Россия, Екатеринбург

Сергей Михайлович Кутепов

ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России

Email: usma@usma.ru
ORCID iD: 0000-0002-3069-8150

д-р мед. наук, чл.-кор. РАН, профессор

Россия, 620028, Екатеринбург, ул. Репина, 3

Список литературы

Дополнительные файлы